高效液相色譜法是采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱，對供試品進行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶入色譜柱內(nèi)，各組分在柱內(nèi)被分離，并進入檢測器檢測，由積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄和處理色譜信號。
高效液相色譜測定有以下方法：
1、定性分析
常用的定性方法主要有但不限于利用保留時間定性、利用光譜相似度定性、利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性幾種。
①利用保留時間定性
保留時間(retention time，tR)定義為被分離組分從進樣到柱后出現(xiàn)該組分最大響應值時的時間，也即從進樣到出現(xiàn)某組分色譜峰的頂點時為止所經(jīng)歷的時間，常以分鐘(min)為時間單位，用于反映被分離的組分在性質(zhì)上的差異。通常以在相同的色譜條件下待測成分的保留時間與對照品的保留時間是否一致作為待測成分定性的依據(jù)。
在相同的色譜條件下，待測成分的保留時間與對照品的保留時間應無顯著性差異；兩個保留時間不同的色譜峰歸屬于不同化合物，但兩個保留時間一致的色譜峰有時未必可歸屬為同一化合物，在作未知物鑒別時應特別注意。
若改變流動相組成或更換色譜柱的種類，待測成分的保留時間仍與對照品的保留時間一致，可進一步證實待測成分與對照品為同一化合物。
當待測成分(保留時間tR，1)無對照品時，可以樣品中的另一成分或在樣品中加入另一已知成分作為參比物(保留時間tR，2)，采用相對保留時間(RRT)作為定性(或定位)的方法。在品種項下，除另有規(guī)定外，相對保留時間通常是指待測成分保留時間相對于主成分保留時間的比值，以未扣除死時間的非調(diào)整保留時間按下式計算。
若需以扣除死時間的調(diào)整保留時間計算，應在相應的品種項下予以注明。
②利用光譜相似度定性
化合物的全波長掃描紫外-可見光區(qū)光譜圖提供一些有價值的定性信息。待測成分的光譜與對照品的光譜的相似度可用于輔助定性分析。二極管陣列檢測器開啟一定波長范圍的掃描功能時，可以獲得更多的信息，包括色譜信號、時間、波長的三維色譜光譜圖，既可用于輔助定性分析，還可用于峰純度分析。
同樣應注意，兩個光譜不同的色譜峰表征了不同化合物，但兩個光譜相似的色譜峰未必可歸屬為同一化合物。
③利用質(zhì)譜檢測器提供的質(zhì)譜信息定性
利用質(zhì)譜檢測器提供的色譜峰分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)的信息進行定性分析，可獲得比僅利用保留時間或增加光譜相似性進行定性分析更多的、更可靠信息，不僅可用于已知物的定性分析，還可提供未知化合物的結(jié)構(gòu)信息。
歡迎來到