液相色譜的原理與分類

　　

　　由以上方法可知，在色譜法中存在兩相，一相是固定不動的，我們把它叫做固定相；另一相則不斷流過固定相，我們把它叫做流動相。

　　

　　色譜法的分離原理就是利用待分離的各種物質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)、吸附能力等親和能力的不同來進行分離的。

　　

　　使用外力使含有樣品的流動相（氣體、液體）通過一固定于柱中或平板上、與流動相互不相溶的固定相表面。當(dāng)流動相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時，混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。

　　

　　由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強弱不同，隨著流動相的移動，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時間不同，從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z測方法結(jié)合，實現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測。

　　

　　

　　色譜分析法有很多種類，從不同的角度出發(fā)可以有不同的分類方法。

　　

　　從兩相的狀態(tài)分類：

　　

　　色譜法中，流動相可以是氣體，也可以是液體，由此可分為氣相色譜法（GC）和液相色譜法（LC）。固定相既可以是固體，也可以是涂在固體上的液體，由此又可將氣相色譜法和液相色譜法分為氣-液色譜、氣-固色譜、液-固色譜、液-液色譜。

　　

　　另外，還有一種超臨界流體色譜法（supercritical fluid chromatography SFC），超臨界流體色譜是指用超臨界流體做流通相，以固體吸附劑（如硅膠）或鍵合到載體（或毛細(xì)管壁）上的高聚物為固定相的色譜法。超臨界流體是在高于臨界壓力和臨界溫度時的一種物質(zhì)狀態(tài)，它既不是氣體也不是液體，但兼有氣體和液體的某些性質(zhì)（藥物色譜分析 主編丁黎 人民衛(wèi)生出版社2008年7月*版）。

　　

　　液相色譜法（HPLC）是繼氣相色譜之后，70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術(shù)。

　　

　　液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。現(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實現(xiàn)了自動化 操作。經(jīng)典的液相色譜法，流動相在常壓下輸送，所用的固定相柱效低，分析周期長。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論，流動相改為高壓輸送（zui高輸送壓力可達(dá)4.9?107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測。因此，液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點。所以人們稱它為高壓、高速、或現(xiàn)代液相色譜法。

　　

　　HPLC 系統(tǒng)一般由液相色譜儀主要由進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。

　　

　　其中高壓輸液泵、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機、自動進樣器、預(yù)柱或保護柱、柱溫控制器等，現(xiàn)代 HPLC 儀還有微機控制系統(tǒng)，進行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型 HPLC 儀還備有自動餾分收集裝置。