DNA合成儀的使用方法操作步驟

　　

　　以亞磷酰胺寡核苷酸合成為例介紹該類儀器的一般操作步驟。亞磷酰胺DNA合成的試劑有：保護(hù)堿基的5/—DMT，A、G、C、T亞磷酰胺單體，四唑偶聯(lián)催化劑，乙酐，N—甲基咪唑封閉試劑，三氯乙酸(TCA)脫保護(hù)溶液，12氧化混合物，乙腈清洗溶劑，氨水切除溶液。使用步驟如下：

　　

　　1)仔細(xì)檢查合成儀上所有試劑瓶中的試劑量，必要時(shí)換掉試劑瓶，特別注意乙腈的量，因?yàn)樵撊軇┯昧枯^大。

　　

　　2)將標(biāo)記好的清潔的收集瓶裝在合成儀上。

　　

　　3)將要合成的DNA序列輸入合成儀。

　　

　　4)檢查選擇的合成步驟是否正確。

　　

　　5)選擇結(jié)束方法：TritylOffAuto是儀器的原始狀態(tài)，若打算以5，—DMT基團(tuán)連接純化寡核苷酸，將其轉(zhuǎn)變?yōu)門ritylOnAuto結(jié)束狀態(tài)。

　　

　　6)選擇結(jié)束方法，一般為系統(tǒng)的原始狀態(tài)。

　　

　　7)在每個(gè)柱監(jiān)視器的Username下，輸入你所希望的保存名字。

　　

　　8)以代碼代替相應(yīng)的DNA序列標(biāo)記每一個(gè)收集瓶。

　　

　　9)打印出每一個(gè)柱設(shè)置的詳細(xì)資料。

　　

　　10)檢查打印出來的資料是否正確。

　　

　　11)運(yùn)行StartColumn步驟檢查每一個(gè)柱的位置，確保合成儀上合成柱處于正確的位置。

　　

　　12)檢查連接在合成儀上的溶劑殘留(廢液瓶)是否充滿。

　　

　　13)如果分部收集器用來收集每個(gè)DMT脫保護(hù)步驟的流出物，確保試管充分清潔干凈，并打開分部收集器，確保DMT廢液管路通向分部收集器。

　　

　　14)啟動(dòng)循環(huán)，運(yùn)行開始程序清洗試劑管路，除去原來的試劑。

　　

　　注意：TritylOnAuto表示在合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個(gè)DMT，并將其從固相載體上切下來，儲(chǔ)存在收集瓶中；TritylOffAuto表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護(hù)基團(tuán)，將其從固相載體上切下來，儲(chǔ)存在收集瓶中；TritylOnManual表示合成寡核苷酸的5’端核苷酸帶有一個(gè)DMT，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中；TritylOffManual表示在合成寡核苷酸的5，端核苷酸沒有保護(hù)基團(tuán)，寡核苷酸沒有從固相載體上切下來，而是保留在合成柱中。